噻唑蓝标准品接种和培养过程，都要怎么样进行
更新时间：2022-07-29 点击次数：186次
噻唑蓝标准品用途常用于基于MTT检测方法的细胞活力、细胞增殖或细胞毒性检测。因为MTT具有正电荷,它可以穿过细胞膜并被线粒体还原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有机溶剂。脱氢酶的检测,染色法。
MTT，商品名称噻唑蓝
全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，一种黄颜色的染料，由于应用于细胞存活率的检测而被熟知。在细胞培养中，MTT不仅仅是一个化学物品，更是一种实验方法。
MTT原理
MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。
噻唑蓝标准品的实验步骤：
1：接种细胞：用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2:培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加溶液(5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4h
终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ulDMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
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