噻唑蓝标准品的化学性质及用于实验的详细步骤
更新时间:2019-04-12 点击次数:697次
噻唑蓝标准品的化学性质及用于实验的详细步骤
1.显著减少检测溶液所需的研制时间和成本
2.确保产品一致性
3.产品按照药典相关需求制作
4.按照受控流程和批量认证的需求制造以确保批与批之间的一致性以及结果的重现性
噻唑蓝标准品的化学性质
黄色或橙黄色粉末,熔点:195℃(分解)。微溶于甲醇中,但难溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能将其*溶解。溶于DMSO中。常配制成5mg/ml的储备液。
噻唑蓝标准品的分子结构式
性状微溶于甲醇中,但难溶于水或乙醇中。用醚、丙酮或乙酸乙酯也不能将其*溶解。195℃溶于水或DMSO。常配制成5mg/ml的储备液。
贮存2-8℃避光保存。
用途常用于基于MTT检测方法的细胞活力、细胞增殖或细胞毒性检测。因为MTT具有正电荷,它可以穿过细胞膜并被线粒体还原形成紫色甲臜染料。溶解MTT甲臜染料需要使用有机溶剂。脱氢酶的检测,染色法。
噻唑蓝标准品的实验步骤:
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4.每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液)100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6.依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。第二抗体是能和抗体结合的,即抗体的抗体。主要用于检测抗体的存在。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长,互相争夺营养和空间,而产生抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。
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